PAGE凝胶电泳的基本原理是什么?
聚丙烯酰氨凝胶电泳简称为PAGE(Polyacrylamide gel electrophoresis),是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用的电泳技术。聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成,聚合过程由自由基催化完成。催化聚合的常用方法有两种:化学聚合法和光聚合法。化学聚合以过硫酸铵(AP)为催化剂,以四甲基乙二胺(TEMED)为加速剂。在聚合过程中,TEMED催化过硫酸铵产生自由基,后者引发丙烯酰胺单体聚合,同时甲叉双丙烯酰胺与丙烯酰胺链间产生甲叉键交联,从而形成三维网状结构!
PAGE根据其有无浓缩效应,分为连续系统和不连续系统两大类,连续系统电泳体系中缓冲液PH值及凝胶浓度相同,带电颗粒在电场作用下,主要靠电荷和分子筛效应。不连续系统中由于缓冲液离子成分,PH,凝胶浓度及电位梯度的不连续性,带电颗粒在电场中泳动不仅有点和效应,分子筛效应,还具有浓缩效应,因而其分离条带清晰度及分辨率均较前者佳。不连续体系由电极缓冲液、浓缩胶及分离胶所组成。浓缩胶是由AP催化聚合而成的大孔胶,凝胶缓冲液为PH6.7的Tris-HCl,分离胶是由AP催化聚合而成的小孔胶,凝胶缓冲液为PH8.9 Tris-HCl。电极缓冲液是PH8.3 Tris-甘氨酸缓冲液。2种孔径的凝胶、2种缓冲体系、3种PH值使不连续体系形成了凝胶孔径、PH值、缓冲液离子成分的不连续性,这是样品浓缩的主要因素。
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