重组TEV蛋白酶（His-tag）的应用
本产品Recombinant TEV Protease是在大肠杆菌中重组表达带His标签(His-tag)的烟草蚀纹病毒(Tobacco Etch Virus,TEV)半胱氨酸蛋白酶。TEV Protease是一种常用的半胱氨酸蛋白酶 ，能特异性地识别七肽序列Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln-Gly/Ser(E-N-L-Y-F-Q-G/S)，并在Gln(Q)和Gly/Ser(G/S)氨基酸残基之间进行酶切 。Recombinant TEV Protease*适酶切温度为30℃，在29-34℃范围均有较高的酶活性，但当温度达到或高于37℃时，其酶活性会急剧下降。在实际操作过程中，为尽量保留目的蛋白结构和生物活性，建议在4℃用TEV Protease酶切过夜。Recombinant TEV Protease在pH 6.0-9.0范围内具有活性 ，而当pH小于或等于5时 ，会失去酶活性。TEV Protease在400 mM咪唑中仍有较高活力，因此对于使用鎳柱纯化含有His标签目的蛋白 ，可直接将TEV Protease加入含高浓度咪唑的纯化的目的蛋白溶液中 ，在4℃透析去除咪唑同时进行酶切 ，也可以在透析后再用TEV Protease进行酶切以去除His标签 。经过酶切后目的蛋白溶液中带有His标签的TEV Protease以及切除的His标签，都可以通过与镍柱结合而去除。
应用：常用于去除融合蛋白中MBP、GST、His或其他标签蛋白 。Recombinant TEV Protease本身带有His标签可以与镍柱结合 。
来源：烟草蚀纹病毒(Tobacco Etch Virus ，TEV)半胱氨酸蛋白酶 ，大肠杆菌重组表达，含His标签。
酶活定义 ：在30℃ ，pH 8.0条件下，1 h内可以将3 μg底物（含有Recombinant TEV Protease酶切位点的蛋白）切割85%以上所需酶量为一个酶活单位 。
失活或抑制：常见的丝氨酸蛋白酶抑制剂如PMSF、AEBSF、bestatin、pepstatin等和EDTA不会抑制TEV Protease活性。而靶向半胱氨酸残基的蛋白酶抑制剂如NEM或IAA等 ，可以显著抑制TEV Protease的酶活力。在较高浓度咪唑中TEV Protease仍保持较高酶活性。
纯度及浓度：SDS-PAGE检测纯度≥95% ，10 U/μL。
Recombinant TEV protease储存液：50 mM Tris-HCl，250 mM NaCl，1 mM EDTA，5 mM DTT，50% (v) Glycerol，pH 8.0。
10×TEV Buffer ：500 mM Tris-HCl，500 mM NaCl，5 mM EDTA ，10 mM DTT ，pH 8.0 。
原创作者：南京5357cc拉斯维加斯首页入口生物技术有限公司
