人外周血单个核细胞分离液的保存条件

阅读次数：15467 发布时间：2023/11/30 15:46:04

人外周血单个核细胞分离液的保存条件

规格:200mL

产品简介:

本产品是一种用于分离人外周血单个核细胞的无菌、低内毒素水平的密度梯度分离液。外周血中单个核细胞(PBMC)包括淋巴细胞和单核细胞，其体积、形态和密度与其他细胞不同，红细胞和粒细胞密度较大，为1.090 g/mL左右，淋巴细胞和单核细胞密度为1.075~1.090 /mL，血小板为1.030~1.035 g/mL。为此利用一种密度介于1.075~1.092之间而近于等渗的溶液做密度梯度离心，使一定密度的细胞按相应密度梯度分布，从而将各种血细胞加以分离。

产品指标:

密度

渗透压

无菌

1.077+0.001g/ml

290~350 mOsm/kg H20

0.1um 滤膜过滤

保存条件:

本产品对光敏感，应该室温避光储存，保质期 2 年。无菌开封后，保存于室温

操作步骤:

1.取新鲜抗凝全血(EDTA、枸惨酸钠或肝素抗凝均可) 或者去纤维蛋白血液，用等体积的全血及组织稀释液或者PBS稀释全血。

2.在离心管中加入适量分离液 (当稀释后血液体积小于3mL时，加入3mL分离液:大于等于3mL,加入等体积分离液。但二者的总体积不能超过离心管的三分之二，否则会影响分离效果)，将稀释后的血液平铺到分离液液面上方，注意保持两液面界面清晰。(可以使用巴氏德吸管吸取血液，然后将血液小心的平铺于分离液上，因为两者的密度差异，将形成明显的分层界面。如果样品较多加样时间较长，在离心之前出现红细胞成团下沉属正常现象。)

3.室温，水平转子500~1000g，离心20~30min(血液的体积越大所需的离心力越大，离心时间越长，的分离条件需摸索，离心转速不超过1200g)。

4.离心后将出现明显的分层: *上层是稀释的血浆层，中间是透明的分离液层，血浆与分离液之间的白膜层即为单个核细胞层，离心管底部是红细胞与粒细胞。

5.小心的吸取白膜层细胞到15mL洁净的离心管中， 10mL PBS或细胞洗涤液洗涤白膜层细胞。