谷草转氨酶（AST/GOT）检测试剂盒如何正确使用！

阅读次数：16007 发布时间：2021/12/22 16:44:03

谷草转氨酶（AST/GOT）检测试剂盒如何正确使用！
产品名称：谷草转氨酶（AST/GOT）检测试剂盒（微板法）
检测原理：
AST/GOT能使a-酮戊二酸和天门冬氨酸移换氨基和酮基，生成谷氨酸和草酰乙酸。草酰乙酸在反应过程中可自行脱羧成丙酮酸。丙酮酸与2,4二硝基苯进反应生成2,4二硝基苯腙，在碱性溶液中显红棕色。比色后，查标准曲线，可求得酶的活力单位。

测定范围：
本试剂盒可以测定各类动物血清(浆)、组织及培养细胞、细胞培养液等样本中谷草转氨酶活力（AST）。
自备仪器和用品：
酶标仪（510nm）、微量移液器、漩涡混匀器
试剂组成：

96T	规格	组分	保存
试剂一	5mlX1瓶	谷草转氨酶基质液	4℃冰箱保存6个月
试剂二	5mlX1瓶	2,4-二硝基苯肼液	4℃冰箱保存6个月
试剂三	5mlX1瓶	4mol/L氢氧化钠液	室温密封保存6个月
试剂四	1支	2umol/ml丙酮酸钠标准液	4℃冰箱保存6个月
试剂五	1支	0.1mol/L磷酸盐缓冲液	4℃冰箱保存6个月
0.4mol/L氢氧化钠液的配制：临用时按4mol/L氢氧化钠液：双蒸水=1:9的比例稀释，需多少配多少，室温密封保存。

操作过程

1.样本前处理：

A.血清（浆）及其他液体待测样本：直接取样测定。

B.动物组织样本：准确称取组织重量，按重量（g）:体积（ml）=1：9的比例，加入9倍体积的生理盐水，冰水浴条件下机械匀浆，2500转/分，离心10分钟，取上清液待测。

C.培养细胞样本前处理：将收集好的细胞用等渗缓冲液（推荐0.1mol/L PH7—7.4磷酸盐缓冲液或生理盐水）清洗1—2次；1000转/分，离心10分钟，弃上清，留细胞沉淀，加入匀浆介质（推荐加入0.1mol/L PH7—7.4磷酸盐缓冲液或生理盐水），冰浴条件下超声破碎或手动匀浆，制备好的匀浆液不离心，待测。

2．操作表：

	测定孔	对照孔
基质液（ul）37℃已预温	2O	20
待测样本（ul）	5

测定孔每吸取一个样本，将吸嘴伸入孔板底部基质液中，反复吸打混匀后

37℃水浴或气浴30分钟

2,4-二硝基苯肼液(ul)	20	20
待测样本（ul）		5

对照孔每吸取一个样本，将吸嘴伸入孔板底部液体中，反复吸打混匀后

37℃水浴或气浴20分钟

0.4mol/L氢氧化钠液(ul)

200

轻轻水平摇动96孔板混匀，室温放置15分钟，510nm波长，酶标仪测各孔OD值，以（绝对OD值=测定孔0D值减去对照孔OD值），查标准曲线，求得相应的AST活力单位。

注意事项：

1.比色法中常用的有赖氏（Reitman-Frankel）法及金氏法（King）法。赖氏法标准曲线所定单位数，是用实验方法和卡门氏反光光度法（速率法）作对比测定求得的。以卡门氏单位报告结果比较准确。
卡门氏单位定义：1ml液体，反应液总容量3ml，波长340nm，1cm光径，25℃，1min内所生成的丙酮酸，使NADH氧化成NAD⁺而引起吸光度每下降0.001为一个单位（1卡门氏单位=0.482U/L,25℃）

2.一般血清标本内源性酮酸很少，血清对照孔吸光度值接近试剂空白孔（以双蒸水代替血清，其他和对照孔同样操作）。所以成批标本测定时，一般不需要每一标本都作本身血清对照孔，以试剂空白孔代替即可，但对严重脂血、黄疸或溶血血清，每份标本应做对照孔。

3.标本酶活力超过150卡门氏单位时，用生理盐水稀释血清后重测。

4.加入2,4-二硝基苯肼溶液后，应充分混匀，使反应玩全，加氢氧化钠溶液的方法要一致，不同方法会导致吸光度读数的差异。

5.血清中AST在室温（25℃）可保存2天，在0－－4℃可保存一周，在-25℃可保存1个月。

6.本产品仅供科研实验用，不做其它用途！

原创作者：南京5357cc拉斯维加斯首页入口生物技术有限公司