植物叶绿素广泛存在于绿色植物组织中,其含量与光合作用、营养状况密切相关,是反应植物生长状况的重要指标。叶绿素a和叶绿素b在645nm和663nm处有吸收,根据经验公式可计算得叶绿素a和叶绿素b以及总叶绿素含量。
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操作步骤:
1. 称取约新鲜植物叶片或其它绿色组织,去掉中脉,称取约0.1g,剪碎,用蒸馏水洗干净。
2. 加入1mL蒸馏水,少量试剂一(约50mg),在黑暗或弱光条件下充分研磨,转入10mL玻璃试管。
3. 用提取液冲洗研钵,将所有冲洗液转入玻璃试管,用提取液定容至10mL,玻璃试管置于黑暗条件下或者包上锡箔纸浸提3h,观察试管底部组织残渣完全变白则提取完全,若组织残渣未完全变白,继续浸提至其完全变白。
4. 取浸提液1mL于1mL玻璃比色皿,提取液调零,测定663nm和645nm处吸光值,分别记为A663和A645 。
注意事项:
1. 叶绿素对光敏感,研磨和提取等操作尽量避光或者在弱光下进行。
2. 一定要浸提至组织残渣完全变白,否则提取不充分。
3. 用提取液冲洗研钵一定要冲洗至所有的绿色物质被转移至玻璃试管。
4. 测定时吸光值超过1,可进行适当稀释。
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