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潮霉素干粉和液体的区别,均可用于植物细胞培养等生化研究 。

阅读次数:1054    发布时间 :2018/11/8 14:49:05

潮霉素干粉和液体的区别,均可用于植物细胞培养等生化研究 。


潮霉素B干粉 :

 效价:≥950U/mg


潮霉素溶液:(100mg/ml)


可用于细胞培养实验溶解后过滤除菌 。

说明:蛋白质合成抑制剂,可用于植物细胞培养等生化研究 。

潮霉素(Hygromycin B)是由吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)代谢产生的一种氨基糖苷类抗生素,通过干扰70S核糖体易位和诱导对mRNA模板的错读而抑制蛋白合成,从而杀死原核(如细菌) 、真核(如酵母菌,真菌)和高等哺乳动物真核细胞。

大肠杆菌( Escherichia coli.)来源的潮霉素抗性基因(hyg或hph),潮霉素B磷酸转移酶,将潮霉素B转化成不具有生物活性的磷酸化产物,从而起到解毒作用。针对这一原理,潮霉素B是一种非常有用的选择性标记,用来筛选和维持培养成功转染潮霉素抗性基因的原核或者真核细胞 。另外,由于作用模式的差异 ,常与G418 (Cat :G8161),Zeocin(Cat:Z8020)和Blasticidin S(Cat:B9300)联合使用进行双抗性阳性细胞株的选择 。潮霉素B还能用作抗病毒剂,因其选择性渗透进入因病毒感染增强通透性的细胞 ,且具有抑制翻译的功效。还可混合入动物饲料中起到驱虫功能 。






使用方法

1.  常用筛选浓度

注意 :潮霉素用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型,培养基,生长条件和细胞代谢率而变化,推荐使用浓度为50-1000μg/mL 。对于次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线(kill curve),即剂量反应性曲线 ,来确定*佳筛选浓度 。

一般而言 ,哺乳动物细胞50-500μg/mL  ;细菌/植物细胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。

2. 杀灭曲线的建立

注意:为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株,需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素浓度,可通过建立杀灭曲线(剂量反应曲线)来实现,至少选择5个浓度。

1)  天:未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上,37℃ ,CO2培养过夜;注 :对于需要更高密度来检测活力的细胞,可增加接种量。

2)  根据细胞类型,设定合适范围内的浓度梯度 。以哺乳动物细胞为例 ,可设定50,100,250 ,500 ,750 ,1000μg/mL。先用去离子水或者PBS buffer按照1:10的比例将母液稀释到5 mg/ml,然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。
3)  第二天:替换旧的培养基,换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。

4)  接下来每3-4天更换新的含药物培养基。

5)  按照固定的周期(如每2天)进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。选择在理想的天数(通常是7-10天)内能够杀死绝大多数细胞的浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。


注意事项

1) 潮霉素的抗性基因(hyg或hph)除了来自E. Coli.之外,还发现于其他的菌株 ,包括Streptomyces hygroscopicus和Klebsiella pneumoniae。

2) 本品为有毒化合物,避免与皮肤和眼睛接触,请小心操作。

3) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作 。


潮霉素干粉和液体的区别,均可用于植物细胞培养等生化研究。

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