明胶酶谱法电泳分析试剂盒最大的问题是什么？

阅读次数：957 发布时间：2018/11/20 13:53:23

明胶酶谱法电泳分析试剂盒的问题是什么？

产品简介：
基质金属蛋白酶（MMP）明胶酶谱法试剂盒操作简单，灵敏度高。上海5357cc拉斯维加斯首页入口生物供应的MMP试剂盒采用酶谱法（zymography）检测 MMP-2、MMP-9 活性。Zymography 是一种广为使用的、基于SDS-PAGE 电泳和反相凝胶染色的蛋白酶检测方法，其灵敏度可达 1 nM，高于 ELISA 方法,而且可检测几百个样本。

基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase, MMP)以无活性的酶原形式分泌，活化后能够降解细胞外基质的胶原蛋白，又称胶原酶。通过影响细胞外基质，胶原酶参与胚胎发育、形态发生、组织重塑等过程，并参与炎症、肿瘤、心血管、神经等许多疾病过程。血浆与组织中的 MMP-2、MMP-9 参与各种生理与病理过程，其在临床诊断和治疗中的意义日益受到重视。

本试剂盒采用酶谱法(zymography)检测 MMP-2、MMP-9 活性。Zymography 是一种广为使用的、基于 SDS-PAGE 电泳和反相凝胶染色的蛋白酶检测方法，其灵敏度可达 1 nM，高于 ELISA 方法 2，其基本原理和程序是：制备加有胶原酶底物的 SDS-PAGE 凝胶，含蛋白酶的样品在此凝胶中进行电泳，电泳结束后取出凝胶与酶反应 Buffer 孵育，凝胶染色与脱色。凝胶中由于含底物蛋白而被深染，形成深色背景，但在有蛋白酶条带的位置，蛋白酶将降解凝胶中的底物蛋白，因而不被染色而形成透亮区域，从而能同时指示 MMP-2、MMP-9 的大小位置(酶谱)及活性。

本试剂盒提供MMP-2、MMP-9 特异蛋白底物及酶学反应缓冲液，可检测少至 0.1~0.5 µl 血液中的 MMP-2、MMP- 9 酶谱及活性，检测灵敏度~1 nM。试剂盒可进行 50 次标准小胶检测，如果小胶加样孔为 10~15个，则总计可检测 500~750 个样品。

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染色步骤：

1. 此染色液即为工作液，使用时直接将聚丙烯酰胺凝胶放在培养皿中以考马斯亮蓝染色液覆盖凝胶，并缓慢摇动 2h；

2. 倾去染色液，用脱色液冲洗凝胶；

3. 以脱色液覆盖凝胶，缓慢摇动 2h，倾去脱色液，再加入新脱色液进行脱色，直至获得清晰的蓝色的条带和干净的背景（通常此过程需要 2～4h，也可脱色过一夜至清晰的蓝色的条带和干净的背景）；

4. 对凝胶进行分析和照相，凝胶可放置在 7％的乙酸中保存。也可用凝胶干胶装置（P2000）对凝胶进行处理后保存。

需要注意的问题：含有甲醇，无特殊毒性，按一般化学品操作规程处理。

说明：

1. 染色液配方：0.25g 考马斯亮蓝 R250 420ml 甲醇 100ml 冰乙酸，定容至 1000ml，混合 1h 后用 Whatman 1 号滤纸过滤，于室温可无限期保存；

2. 脱色液配方：冰醋酸:甲醇:水＝7:5:88（V:V:V）；

3. 保存液：7％冰醋酸；

4. 凝胶染色之后，染色液可以回收利用，装入新容器内，室温或 4 ºC 保存，可反复使用 2-4 次。

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