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丙酮酸(PA)含量检测试剂盒丙酮酸的提取!

阅读次数:1137    发布时间:2019/9/10 14:21:13

丙酮酸(PA)含量检测试剂盒丙酮酸的提取!


产品说明:
丙酮酸通过乙酰CoA 连接葡萄糖、脂肪酸和氨基酸三大代谢,起着重要的枢纽作用。丙酮酸与2,4-二硝基苯肼作用 ,生成丙酮酸-2,4-二硝基苯腙,在碱性溶液中呈樱红色。


需自备的和用品:
可见分光光度计、台式、可调式移液器、1 mL 玻璃比色皿、研钵 、冰、蒸馏水。


操作步骤:

一、丙酮酸提取:
1、 细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清 ;按照细菌或细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为500~1000:1 的比例(建议500 万细菌或细胞加入1mL 提取液) ,超声波破碎(冰浴,功率20%或200W ,超声3s,间隔10s,重复30 次),静置30min,8000g,常温离心10min,取上清待测 。

2 、 组织 :按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1 :5~10 的比例(建议称取约0.1g 组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆 ,静置30min,8000g ,常温离心10min ,取上清待测 。

3 、 血清(浆)样品:按照血清(浆)体积(mL):提取液体积(mL)为1:5~10 的比例(建议取0.1mL血清(浆)加入1mL 提取液),进行冰浴匀浆 ,静置30min,8000g ,常温离心10min ,取上清待测。

4 、 标准品的准备 :将标准品用蒸馏水稀释至100、50、25 、12.5、6.25、3.125 、1.5625、0mg/ml。


测定步骤:

1 、 分光光度计预热30min 以上,调节波长至520nm ,蒸馏水调零 。

2、 取300μL标准品或样本+100μL 试剂一于1.5mL EP 管中 ,混匀,静置2min ,加入500μL 试剂二,混匀 ,于520nm 波长处测定吸光值A。


丙酮酸钠是*常见的丙酮酸盐,别名焦葡萄酸钠、2-羰基丙酸钠盐,分子式为C3H3NaO3,是一类内源性小分子物质,丙酮酸钠和丙酮酸均是天然存在于人体内,并参与全身各组织和器官的代谢 。丙酮酸钠在医学上、诊断试剂以及医疗器械中被广泛用作缓冲剂 、赋形剂和抗氧化剂。


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