漆酶活性检测试剂盒应该怎么用

阅读次数：906 发布时间：2021/6/29 11:41:21

漆酶活性检测试剂盒应该怎么用

漆酶*早发现于漆树的分泌物中，并存在于多种高等植物的细胞壁中，如茶叶的嫩芽。高等植物来源的漆酶相对于真菌漆酶报道较少。实际应用于生产的漆酶主要来源于细菌、真菌，大多数真菌分泌漆酶。国内外的主要生产菌种为白腐真菌（white-rot fungi）。国内对漆酶的应用研究主要集中在分解木质素、纸浆漂白、染料废水脱色、降解环境中有毒物质等方面。

产品说明：漆酶（CE1.10.3.2）是一种含铜的多酚氧化酶，属于铜蓝氧化酶家族，漆酶存在菇、菌及植物中，是一种环保型酶，其独特的催化性质在生物检测中有广泛的应用。漆酶分解底物ABTS产生ABTS自由基，在420nm处的吸光系数远大于底物ABTS，测定ABTS自由基的增加速率，可计算得漆酶活性。

操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2、细胞：按照细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后 4℃，10000g 离心 10min，取上清置于冰上待测。 3、培养液：直接检测。

注意事项：
1、工作液需临用前配制，并且尽快使用，4℃保存一周，若变色则不能使用。
2、测定之前进行预实验，若吸光值较高，请将样本用提取液进行适当的稀释再测定，并在计算公式中乘以稀释倍数。
3、空白管为检测各试剂组分质量的检测孔，正常情况下，OD 值变化不超过 0.05。

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