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阅读次数 ：975 发布时间：2021/7/6 14:24:32
动物组织/细胞基因组 DNA 提取试剂盒原来可以这样操作操作步骤：使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入休积请参照瓶体上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心 。
1 、样品的处理：
a 、细胞：取 1×106 -1×107 个悬浮培养细胞，12000rpm 离心 1min 收集细胞，贴壁细胞先用胰蛋白酶消化处理，再用预冷的 PBS 吹打成细胞悬液，然后 12000rpm 离心 1min 收集细胞，尽量除去上清 ，加 200ul 溶液 A ，振荡至彻底混匀。
b 、组织：组织量不宜过大，一般不要超过 25mg，可以使用匀浆器匀浆，用液氮研磨成粉末状，再用预冷的 PBS 或无菌水充分悬浮，然后 12000rpm 离心 1min 收集细胞，尽量除去上清 ，加 200ul 溶液 A，振荡至彻底混匀 。
2、向悬浮液中加入 20ul 的 RNase A (10mg/ml)，55℃放置 15min 。
3、加入 20ul 的蛋白酶 K( 10mg /ml ) ，充分颠倒混匀，55℃水浴消化 ，细胞消化时间较短，组织消化时间较长，一般需要 1-3 个小时才能完成（鼠尾需要消化过夜）。消化期间可颠倒离心管混匀数次，直至样品消化完全为止。消化完全的指标是 ：液体清亮及粘稠
4、加入 200ul 体积溶液 B，充分颠倒混匀，如出现白色沉淀，可放置于 75℃ 15-30min ，沉淀即会消失 ，不影响后续实验。如溶液未变清亮，说明样品消化不彻底，可能导致提取的 DNA 量少及不纯，还有可能导致堵塞吸附柱 。
5、加入 200ul 无水乙醇，充分混匀 ，此时可能会出现絮状沉淀，不影响 DNA 的提取 ，可将溶液和絮状沉淀都加入吸附柱中 。
6、12000rpm 离心 1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中
注意事项:
1、试剂盒拆封后，RNase A和蛋白酶K需放置-20℃保存。
2 、样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。
3、如果试剂盒中的溶液出现沉淀，可在65℃水浴中重新溶解后再使用，不影响效果。
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